„Jolene” este un dialog muzical plin de suspans între două femei: naratoarea îndrăgostită și fascinanta Jolene, descrisă ca având păr arămiu, piele de fildeș și ochi verde-smarald. Într-o rugăminte aproape disperată, vocea principală o imploră pe rivală să nu-i fure iubitul, recunoscând atât frumusețea ei irezistibilă, cât și propria vulnerabilitate. Versurile arată cum admirația se împletește cu gelozia, transformând cântecul într-o confesiune despre insecurități și frica de a pierde dragostea.
Interpretarea a capella a grupului Pentatonix (alături de însăși Dolly Parton, autoarea originală) amplifică dramatismul, folosind doar voci pentru a crea ritm, armonii și tensiune. Melodia vorbește despre puterea seducției și alegerea morală: Jolene ar putea lua pe oricine, însă fericirea naratoarei depinde de decizia ei. Astfel, piesa devine o lecție despre respect, limite și importanța comunicării sincere atunci când iubirea este pusă la încercare.